Download Free Medical ANALITIKA OTROVA PowerPoint Presentation

ANALITIKA OTROVA PowerPoint Presentation

DOWNLOAD MEDICAL POWERPOINT PRESENTATION

About This Presentation

Description : analitika otrova

Tags : analitika

Published on : Dec 24, 2019 | Views : 2229 | Downloads : 1

Shareable Url :

Embed Code :

Comment

Transcript

Slide 1-

Analitika otrova Doc dr. Maja Vujović
Slide 2-

1. GASOVI 2. LAKO ISPARLJIVI 3. BILJNI I SINTETSKI 4. METALI 5. PESTICIDI 6.KISELINE I BAZE 7. OSTALO OTROV Podela otrova prema sistemskom istraživanju odnosno prema načinu izdvajanja iz biološkog materijala
Slide 3-

uzorak preliminarni test neisparljive sup. neorganska sup. organske sup. isparljive sup. imunohemijske metode ekstrakcija PP, TTE SPE, SPME „Headspace“- HS AAS ICP-MS IC RENGENO FLUORESCENCIJA GC MS MS HPLC TLC FT-IR Dijagram analitičkih metoda za lekove i otrove
Slide 4-

Opšti postupci toksikološko-hemijske analize Izbor i količina adekvatnog biološkog uzorka Pravilno uzorkovanje (antikoagulans ili ne) i obeležavanje uzoraka Očuvanje stabilnosti uzorka (prezervacija - konzervansi: 1%NaF, temperatura: +4°C/-20°C) i transport uzoraka Priprema uzoraka za analizu Identifikacija i kvantifikacija analita u uzorku primenom odgovarajućih analitičkih tehnika Obrada i tumačenje dobijenih rezultata Pisanje Toksikološko - hemijskog izveštaja - finalni zvanični dokument o urađenoj toksikološkoj analizi Arhiviranje izveštaja i čuvanje uzoraka za potrebe superanalize
Slide 5-

Biološku uzorci za sudsko-toksikološku analizu
Slide 6-

Priprema bioloških uzorka Cilj dobre pripreme - dobijanje željenog analita što veće: čistoće i prinosa Uklonjanje interferirajućih endogenih i egzogenih supstanci iz kompleksnog biloškog matriksa u što većem procentu! Smatra se da priprema uzorka na uspešnost hromatografske analize utiče od 70 - 90 %. Neadekvatna priprema uzorka : utiče na lošiji izgled hromatografskih pikova, skraćuje vek analitičkih kolona, usporava rad i/ili zapušuje hromatografske sisteme i smanjuje osetljivost metode
Slide 7-

Vrste interfereci iz biološkog mtriksa i čistoće posuđa Soli u zavisnosti od koncentracije u uzorku i primenjene detekcione tehnike mogu u velikoj meri uticati na osetljivost metode. LC i LC-MS analize su znatno manje podložne kontaminaciji solima u odnosu na GC i GC-MS analize gde može doći do depozicije soli u samom sistemu. Proteini imaju relativno visoku koncentraciju u biloškim uzorcima i hrani. Strukura varira od naelektrisanih, visoko polarnih do hidrofobnih neutralnih vrsta a njihovo ponašanje u prirodnom obliku može da varira od uzorka do uzorka. Fizičko taloženje proteina predstavlja mehanički rizik. Masti, hidrofobni a ponekada i naelektrisani deo molekula lipida može izazvati ozbiljene probleme u hromatografiji; fizičko vezivanje za stacionarnu fazu i jonsku supresiju pa samim tim i na smanjenje osetljivosti metode. Šećeri Pigmenti - planarne i rektivne prirode, u LC i LC/MS analizi utiču na smanjuju performansi kolona i supresiju jonizacije, dok kod GC i GCMS analize na taloženje i kvar aparata. Surfaktanti - površinski aktivne supstance lipidne prirode (fizičko vezivanje za kolonu i supresija jonizacije) Čvrste partikule
Slide 8-

Vrste uzoraka za toksikološku analizu: Humani biološki materijal (krv, urin, lavat, saliva, TST, organi, CST-likvor, želudačni i crevni sadržaj, kosa, nokti, kosti i dr.) Biljni, životinjski materijal Nebiološki materijal (praškaste supstance, vazduh, voda, zemljište)
Slide 9-

Osnovni faze u pripremi uzorka BEZ PRIPREME UZORAK SA PRIPREMOM - Fluoridi urinu - Kiseline/baze - Alkoholi „headspace“ ekstrakcijim HROMATOGRAFIJA ANALIZA METALA - Mineralizacija do suva - Razblaživanje 1%HNO3 - Filtriranje - Merenje
Slide 10-

Tehnike pripreme bioloških uzoraka Razblaživanje uzorka Precipitacija proteina (PP) Tečno-tečna ekstrakcija (TTE) (neisparljiva organska jedinjenja) Tečno-čvrsta ekstrakcija (SPE) Headspace (HS) metoda, (lakoisparljiva jedinjenja) Mineralizacija (minerali) - suva (žarenjem na visokim tem.), - mokra (na niskoj temperaturi + oskdaciono sredstvo) Mikrotalasna pećnica, (minerali) Destilacija ili difuzija (lakoisparljiva jedinjenja) Dijaliza (anjoni) Izbor tehnike zavisi od vrste uzorka, osobina otrova i primenjene anlitičke metode
Slide 11-

Precipitacija proteina (PP) Prednosti efikasna metoda za uklanjanje proteine (albumina) iz uzoraka plazme, omogućuje pripremu većeg broja uzoraka za kraće vreme, pogodna je za automatizaciju i predstavlja opštu metodu za pripremu uzoraka plazme Nedostaci nedovovoljno čisti uzorci (soli i masti), mogućnost kontaminacije kolone i instrumenta, otežano uparavanje rastvarača Princip Taloženje proteina, denaturacija pomoću: org,rastvarača (metanol, etanol, acetonitril, aceton), toplote, enzima, ultrazvuka i dr.
Slide 12-

Tečno-tečna ekstrakcija (TTE) Najčešći organski rastvarači za TTE
Slide 13-

Ekstrakti lekova i nekih supstanci koji se zloupotrebljavaju dobijeni tečno-tečnim ektrakcionim postupkom Opšta šema ekstrakcije supstanci iz biološkog uzorka
Slide 14-

TTE Prednost jeftina i efikasno uklanja neorganska jedinjenja i soli, dobijaju ekstrakti zadovoljavajuće čistoće, ali sam postupak je nisko reproduktivan i dugo traje. Nedostaci ekstrakti moraju da se uparavaju, koristi velike količine rastvarača (hlorisanih), komplikovana za automatizaciju, neselektivna, stvara emulzije i loše razdvaja faze. Princip Nerstov zakon, više puta sa manjom količinom ratvarča, film epruvete
Slide 15-

Tečno-čvrsta ekstrakcija (SPE, solid phase extraction) Vrste kopolimerizovanih adsorbenasa: HLB - neutralni; MCX – katjonski jonoizmenjivač; MAX - anjonski jonoizmenjivač HLB MCX MAX
Slide 16-

Osnovni principi SP ekstrakcije kondicioniranje (conditioning), nanošenje uzorka (sample addition), pranje (washing) i eluiranje analita (elution) Tipovi adsorbensa u SPE kertridžima
Slide 17-

Prednosti SPE: veliki izbor nosač/rastvarač kombinacija - visoka specifičnost i selektivnost ne zahteva primenu višekomponentnih pufera,, potrebne male količine uzorka i rastvarača, jednostavna upotrebe, nije neophodno uparavanje ekstrakta što je pogodno za termolabilne analite, smanjen kontakt sa štetnim materijama i minimalno isparavanja rastvarača, minimalan transfer uzorka, visoki prinosi (>95%) i čistoća ekstrakata, ne javlja se problem emulzije, izolovanje jonizovanih oblika molekula (kvater. amon. soli) ne zahtevaju ekstremno visoke pH automatizacija – on line ekstrakcija Glavni nedostatak je vreme potrebno za razvijana metode i cena separacionog sistema (kertridži, manifold, vakum pumpa) Šema LC sistema sa on line ekstrakcijom
Slide 18-

Nebiološki materijal-priprema Vazduh – adsorpcija na čvrstom nosaču, ekstrakcija Zemljište – homogenizacija, ekstrakcija Voda – ukoncentrisanje, ekstrakcija, SPE Uzorkivač vazduha Gasne ispiralice
Slide 19-

Hemijske i fizičko-hemijske metode za određivanje otrova Tip analize Predhodne probe, preliminarni testovi: imunohemijska test trake, kolor testovi (bojene reakcije) sa pripremom i bez pripreme uzorka tzv. direktne probe iz krvi, urina i/ ili žel. sad. „Screening“ tesovi (test trake, kolor testovi, tehnike: GC/MS, multikolonski HPLC, TLC) Ciljane analize Konfirmacione analize
Slide 20-

Prethodne probe Reakcija materijala (lakmus hartija) Miris i boja (cijanidi, fenol, hloroform) Probe reagens hartijama : Guignard –ov reagens: cijanovodonik→crveno Olovo – acetat: H2S →crno AgNO3: H2S ili P → crno Spektroskopsko ispitivanje krvi (CO)
Slide 21-

Kolor testovi Salicilati – Trinderov test, (4% Fe(NO3)3 u 0,01M HCl ) Isparljive redukcione supstance (etanol, metanol)– Test bihromata Fenotiazini – FPN reag., (50 % v/v HNO3, 45 % v/v HClO4 i 5 % v/v FeCl3 ) Triciklični antidepresivi – Forestov reag. Trihloro jedinj. (crvena boja u piridinu)– Fujiwara test (piridin) Paracetamol (plavo) – Krezol amonijačni test Ethlorvinol – Difenilamin test Parakvat (plavo) i dikvat (zeleno) – Ditionit test (Na ditionat)
Slide 22-

Prednosti kolor testova - brzi, jeftini i jednostavni za izvođenje; usmeravaju i olakšavaju dalja istraživanja. Nedostaci kolor testova – nisu specifični (jedan reagens daje boju sa većim brojem jedinjenja/funkcionalnih grupa; jedno jedinjenje sa više funkcionalnih grupa se može dokazati sa većim brojem kolorh testova); veliki broj interferirajućih supstanci; teško tumačenje testa ako su polazna jedinjenja već obojena. Kolor testovi se izvode na sahatnim staklima sa malom količinom uparenog ekstrakta. Uporedo se rade i reakcije sa kontrolnim uzorkom/ekstraktom i standardom (čistom supstancom).
Slide 23-

Imunohemijske metode Imunohemijski analizatori Imuhemijske test trake
Slide 24-

ppt slide no 24 content not found
Slide 25-

Separacione i druge metode Tankoslojna hromatografija (TLC) Gasna hromatografija (GC), GC/FID, GC/MS Tečna hromatografija (LC), HPLC, LC/MS ICP/MS UV/VIS detekcija, PDA AAS, AES IR Polarografija Kolorimetrija HS-GC/MS LC/MS TLC
Slide 26-

Primena hromatografskih tehnika GC barbiturati meprobamat glutetimid salicilati fenitoin pesticidi etilalkohol metanol HPLC benzodiazepini fenotiazini salicilati barbiturati verapamil atenolol propranolol tri/tetracik. antidepr. LC/MS antibiotici kofein teofilin teobromin nifedipin enalapril LSD morfin (metab.) kodein (metab.)
Slide 27-

Nisko= +; Visoko=++++; UV-VIS = Ultra ljubičasta i vidljiva spectrofotometrija; TLC=Tankoslojna hromatografija; IA= Imunoesej;GC= Gasna hromatografija;AAS=Atomska absorpciona spektrometrija; ICP-MS=Induktivno spregnuta gasno masena spektrometrija Analitičke metode koje se najčešće koriste za analizu bioloških uzoraka na prisususto otrova/lekova
Slide 28-

UHPLC-MS/MS Šema MRM – Multi Reaction Monitoring moda Brza Osetljiva Specifična Primena široka: analiza kvaliteta životne sredine, hrane, proteomika, genomika, kontrola SKIZ, u farmaceutskoj industriji otkrivanje i razvoj novih lekova, prevencija i/ili praćenju mogih bolesti genetske, endokrinološke, metaboličke ili hematološke etiologije, pre-natalnim i post-natalnim screenig Analiza jedinjenja srednje i visoke polarnosti (lekovi, pesticidi, droge, proteini, nukleinske kiseline, ugljenihidrati, azo - jedinjenja, steroidi, ugljovodonici, antibiotici, metalo-organska jedinjenja)
Slide 29-

Validacija bioanalitičkih (BA) metoda Validacija metode može biti delimična ili potpuna i obuhvata najmanje 4 faza: 1) validaciju softvera, 2) kvalfikaciju ili validaciju analtčkih instrumenata, 3) validaciju metode, i 4) validaciju pogodnosti sistema Proces validacije BA metode otpočinje validacijom softvera i kalibracijom instrumenta, zatim se ispituje i razvija analitička metoda i na kraju potvrđuju performanse metode testovima za pogodnost sistema (test uzorci – kalibratori) Referentni analitički standardi Interni standardi Osnovni rastvori standarda Radni rastvori standarda Opterećeni uzorci (važni za određivanje prinosa metode)
Slide 30-

Validacioni parametri Razvoj bioanalitičke metoda može se podeliti na tri dela: priprema referentnih standarada, razvoj i validacija metode i primena validirane metode na rutinske analize otrva/lekova. Analitičke karakteristike koje se ispituje u validaciji bioanalitičkih metoda su: Limit detekcije (LOD), limit kvantifikacije (LOQ), linearnost, opseg merenja, kalibracione krive standarda i kalibtratora Selektivnost/specifičnost Tačnost, preciznost (inter i intra dnevna) i ekstrakcioni prinos Stabilnost uzoraka Robustnost (postojanost) metode
Slide 31-

Kraj