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Antibiogramme Des Staphylocoques PowerPoint Presentation

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Description : antibiogramme of staphylococcus

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Published on : Jun 25, 2018 | Views : 2647 | Downloads : 0

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Antibiogramme des staphylocoques , phénotypes de résistance et les tests complémentaires. Présenté par : Bouali Mohammed Amine Chakroun Salem Boukhmis Abderaouf
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Plan: Introduction I.Rappel sur les staphylocoques. II.Antibiogramme. A.Test de sensibilité aux antibiotiques. 1.détermination de la CMI par microdilution 2.méthode par diffusion en milieu gélosé III.Phénotypes de résistance et tests complémentaires. 1.Staphylocoques et bêtalactamines 2.staphylocoques et tétracyclines 3.staphylocoques et MLS 4.autres résistances
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Introduction: Les staphylocoques sont des bactéries impliquées dans des pathologies variées et de degrés de gravité divers. Elles sont un des premiers agents responsables d'infections nosocomiales mais elles peuvent aussi être contractées en dehors de l'hôpital. Leur habitat naturel est l'homme et l'animal. Elles font partie de la flore cutanée naturelle et colonisent particulièrement les muqueuses externes. Cependant, ces bactéries sont fréquemment retrouvées dans l'environnement (eaux non-traitées, sols, objets souillés). Les traitements visant à éradiquer les infections sont difficiles car de nombreuses souches sont multi résistantes aux antibiotiques. Selon les services hospitaliers, ces dernières représentent entre 20 et 50% des souches.
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I.Rappel sur les staphylocoques
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Famille: Micrococcaceae ; Genre: Staphylococcus ; Environ 44 espéces dont : Chez l'homme, les espèces les plus couramment isolées sont : Staphylococcus aureus, le plus pathogène, Staphylococcus epidermidis, souvent considéré comme un opportuniste, Staphylococcus saprophyticus, responsable d'infections urinaires chez la femme jeune (cystite) et à une fréquence moindre, St. haemolyticus, St. hominis, St. capitis et St. auricularis.
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1.Transmission et pouvoir pathogène La transmission intra ou interhumaine s’opère généralement par contact direct => manuportage Plus rarement, elle peut être indirecte à partir d’une source environnementale (vêtements, draps, matériels médicaux). Responsable de plusieurs infections : Infections communautaires et nosocomiales Infections cutanéo-muqueuses (folliculite, furonculose, anthrax) Septicémies, endocardites, méningites…. Intoxications alimentaires Infections urinaires 6
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2.Principaux caractères bactériologiques Cocci à Gram positif groupés en amas , immobiles , non sporulés et ne présentent pas de capsule visible au microscope Aéro-anaérobie facultatif, non exigeant Ils se développent rapidement à 37°C sur les milieux usuels : Gélose nutritive Milieux sélectifs: Chapman, Baird Parker Catalase + 7
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3.Caractères spécifiques au staphylococcus aureus La plupart des souches de S. aureus élaborent un pigment qui donne une couleur jaune-orangé aux colonies. Coagulase + Dnase (thermonuclease) + Staphorex (test d’agglutination ) +
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4.Coloration de Gram
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5.Aspect en culture
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II.Antibiogramme
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A.Test de sensibilité aux antibiotiques (Techniques standardisées – Eucast Février 2018 ) 1.détermination de la CMI par microdilution selon les normes ISO standard 20776-1: Milieu: bouillon Mueller Hinton Inoculum: 5*10^5 UFC/ml Incubation: atmosphére normal 35 ± 2 °C 20 ± 4H Lecture: en absence d’indication particuliére, la CMI correspond à la concentration la plus faible avec laquelle la croissance bactérienne n’est pas visible. Contrôle de qualité: S.aureus ATCC 29213. Rq: la technique de dilution en gélose est la méthode de référence pour la fosfomycine. 12
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2.méthode par diffusion en milieu gélosé: Milieu: gélose mueller hinton Inoculum: 0,5 McFarland Incubation: atmosphére normal 35 ± 2 °C 20 ± 4H ( La durée d’incubation peut être prolongée dans certains cas :oxacilline, glycopeptides et macrolides) Contrôle de qualité: S.aureus ATCC 29213, souches complémentaires staphylococcus haemolyticus CIP 107204,staphylcoccus aureus NCTC12493 résistante à la méthicilline. 13
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2.1.Application des disques d’antibiotiques : Il est préférable de ne pas mettre plus de 6 disques d’antibiotiques sur une boîte de 90 mm de diamètre. Les disques d’antibiotiques doivent être espacés de 24 mm , centre à centre. Presser chaque disque d’antibiotique à l’aide d’une pince bactériologique stérile pour s’assurer de son application. Une fois appliqué, le disque ne doit pas être déplacé. Tester la liste d’antibiotiques indiqués dans les tableaux suivants:
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2.2.Antibiotiques à tester (Liste standardisée,EUCAST 2018) LISTE STANDARD: Pénicilline G Céfoxitine Gentamycine Erythromycine Clindamycine Quinupristine-dalfopristine Norfloxacine Fluoroquinolone Acide fusidique Cortimoxazole Rifampicine 15
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Liste complémentaire: Ceftaroline Vancomycine Teicoplanine Kanamycine Tobramycine Netilmicine Trimethoprime Chloramphénicol Tétracyclines Minocycline Tigécycline Linézolide nitrofurantoine Fosfomycine Oxacilline Daptomycine mupirocine
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2.3.Lecture : Mesurer avec précision les diamètres des zones d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse métallique, à l’extérieur de la boîte fermée. Comparer ces résultats aux valeurs critiques figurant dans la table de lecture jointe. Classer la bactérie dans l’une des catégories : Sensible, Intermédiaire ou Résistante. NB : La souche de contrôle ATCC 25923 doit être testée dans les mêmes conditions.
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III.Phénotypes de résistance et tests complémentaires
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1.Staphylocoques et bêtalactamines 19
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Actuellement, environ 95% des souches sont résistantes à la pénicilline G, aux aminopénicillines, aux Carboxypenicillines et aux uréidopénicillines <=> productrices de Pénicillinase. (Il n’existe pas de méthode fiable de détection de la production de pénicillinase pour les espèces autres que S. aureus.) Depuis quelques années , les Staphylocoques ont développé une résistance à la méthicilline par modification de la cible (modification de la plp2a géne mecA) ; ces souches sont communément appelées souches méti-R ou SARM (S. aureus Résistant à la Méthicilline). En milieu hospitalier, 20 à 40% des souches sont SAMR (Ha-SAMR )
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Les souches communautaires sont, en général, sensibles à la méthicilline,, cependant depuis quelques années, nous observons la diffusion de souches communautaires résistantes à la méthicilline (Co SAMR) la ceftaroline (CS3G) et le ceftobiprole (CS5G) possèdent une activité sur les staphylocoques résistants à l’oxacilline mais leur activité doit être testée séparement. Les staphylocoques résistants à la méticilline sont souvent résistants à de multiples familles d’antibiotiques; cependant, certaines souches ont une résistance isolée à l’oxacilline, notamment les souches possédant le gène mecC.
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Autres résistances (plus rares): BORSA (Borderline Staphylococcus aureus) : hypersécrétion de pénicillinase provoquant une hydrolyse des pénicillines M. On observe une résistance de bas niveau à l’oxacilline. Ces enzymes sont plus ou moins inhibés par les inhibiteurs de b-lactamases. Ces souches restent sensibles aux céphalosporines, carbapénèmes … MODSA (Modified Staphylococcus aureus) : modification des PLP autre que la PLP2a. Ces souches présentent une résistance isolée et de bas niveau à l’oxacilline.
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La sensibilité des staphylocoques aux carbapénèmes est déduite de celle à la céfoxitine.
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Phénotypes de résistance aux bêtalactamines 24
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Recherche de la méthicillino-résistance 25
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Recherche des MRSA screening test 26 S.aureus ATCC 43300 S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43866 Souche à tester Screening test
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Milieu : Gélose MH additionné de 4% de NaCl et de 6µg d’oxacilline. Préparation de la solution d’oxacilline : Diluer 6 mg d’oxacilline (poudre injectable d’un flacon de 1g) dans 10 ml d’eau distillée stérile, puis faire une dilution au 1/10ème. Prendre 2 ml de cette solution dans une boîte de Pétri de 90mm de diamètre. ajouter 18ml de gélose MH additionnée de 4% de NaCl. Mélanger en faisant des mouvements rotatoires. Laisser solidifier puis sécher les boîtes à l’étuve. Inoculum : A partir d’une culture pure de 18 h sur milieu d’isolement, préparer une suspension bactérienne en eau physiologique à 0,9% d’une opacité équivalente à 0,5 Mc Farland. L’ensemencement doit se faire dans les 15mn qui suivent la préparation de l’inoculum.
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Ensemencement : L’ensemencement se fait par spot, en appliquant verticalement ,sur la gélose, l’extrémité d’un écouvillon trempé dans la suspension bactérienne (ou ensemencer un cadran entier). Les souches de référence doivent être testées dans les mêmes conditions : S.aureus ATCC 29213 sensible à l’oxacilline . S.aureus ATCC 43300 résistant à l’oxacilline. Incubation : 24h à 35°C en atmosphère ordinaire. Lecture : La culture de plus d’une colonie de la souche test indique une résistance à l’oxacilline, impliquant la résistance à toutes les bêta-lactamines.
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Test d’agglutination Réactifs : Slidex MRSA detection (biomerieux). ou PBP2’ Test (OXOÏD). Recherche des MRSA Recherche de la PLP2a
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30 Souche MRSA + Présence d’agglutination Souche MRSA – Absence d’agglutination
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2.Staphylocoques et tétracyclines
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Les souches sensibles à la tétracycline sont aussi sensibles à la doxycycline et la minocycline. Par contre, certaines souches résistantes à la tétracycline peuvent être sensibles à la minocycline et/ou la doxycycline. Pour les souches résistantes à la tétracycline, la sensibilité à la doxycycline doit être vérifiée si nécessaire par une mesure de la CMI. Pour la Tigécycline , les souches ayant des CMI au dessus de la concentration critiques sont très rares. Les souches présentant de tels résultats doivent être vérifiées puis adressées pour confirmation dans un laboratoire référent.
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3.Staphylocoques et MLS (Macrolides, lincosamides et streptogramines) 33
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Dans environ 90% des cas, la résistance aux MLS des staphylocoques dorés est de type MLSB (plutôt constitutive chez les SARM et plutôt inductible chez les SAMS). Le phénotype MLSB constitutif touche aussi les kétolides (dérivés de l'érythromycine produits par hémisynthèse ); La résistance à la pristinamycine est rare, elle s’acquiert par association de mécanisme de résistance (ex : MLSB + SA) En cas de résistance au composé B des synergistines, leur activité ne repose plus que sur le composé A, on ne peut donc pas affirmer le caractère bactéricide de la synergistine.
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La résistance inductible à la clindamycine ne peut être détectée qu'en présence d'un macrolide. Elle est mise en évidence sur l'antibiogramme par une image d'antagonisme entre la clindamycine et l'érythomycine (D-test). En cas de résistance à la clindamycine, l'activité de la pristinamycine est diminuée. Devant une souche résistante à l’érythromycine et sensible à la clindamycine, rechercher le caractère inductible de cette résistance (antagonisme érythromycineclindamycine). En l’absence d’induction, répondre sensible à la clindamycine, spiramycine et lincomycine. En présence d’induction, répondre sensible à spiramycine,lincomycine et clindamycine avec le message suivant : de rares échecs cliniques ont été rapportés par selection de mutants constitutifs résistants.
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Phénotypes de résistance aux MLS 36
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37 S.aureus MLSb inductible
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S.aureus MLSb constitutive 38
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4.Staphylocoques et aminosides 39
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Résistance principalement par acquisition d’enzymes inactivant l’aminoside. La gentamicine est l’aminoside le plus souvent actif sur le staphylocoque doré. En cas de résistance à la gentamicine, la bactérie sera résistante à tous les aminosides (phénotype KTG) sauf streptomycine. L’utilisation de kanamycine et de tobramycine dans l’antibiogramme sert à détecter les phénotypes K et KT. phénotype K : présence d’une APH(3’)-III phénotype KT : présence d’une ANT-(4’) phénotype KTG : présence d’une APH(2’’) – AAC(6’) Environ 80% des SARM (Staphylococcus aureus résistant à la méticilline) sont de phénotype KT.
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En cas d’indisponibilité du disque kanamycine 30 μg, les souches présentant un diamètre d’inhibition de 6 à 12 mm autour d’un disque de kanamycine 30 UI (24 μg) pourront être caractérisées résistantes à l’amikacine. Les souches résistantes à la tobramycine sont résistantes à la kanamycine et à l'amikacine.
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Phénotypes de résistance aux aminosides 42
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5.Autres résistances
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Staphylocoques et fluoroquinolones
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Le principal mécanisme de résistance du staphylocoque doré aux fluoroquinolone est une mutation de la cible (ADN gyrase ou topoisomérase IV). Il confère une résistance croisée à toutes les fluoroquinolones. D’autres mécanismes d’efflux ou de défaut de pénétration sont plus rares. Les souches catégorisées sensibles à la norfloxacine peuvent être rendues sensibles à la ciprofloxacine, à la lévofloxacine, à la moxifloxacine et à l'ofloxacine. Pour les souches non sensibles à la norfloxacine, chaque fluoroquinolone doit être testée individuellement.
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Résistance au cotrimoxazole Résistance par modification ou hyperproduction de la cible.
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Résistance à l’acide fusidique, la rifampicine, la fosfomycine Ces 3 résistances surviennent à haute fréquence, il est donc déconseillé d’utiliser ces molécules en monothérapie (apparition rapide de mutants résistants).
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Résistance aux glycopeptides
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VISA (Vancomycin Intermediate Staphylococcus aureus), GISA (Glycopeptide Intermediate Staphylococcus aureus) : Depuis 1997, des souches présentant une sensibilité diminuée aux glycopeptides ont été décrites résistance rare, généralement de bas niveau et chez des sujets ayant eu des traitements au long court par glycopeptides. Des souches avec des CMI très élevées pour les glycopeptides ont été décrite : VRSA, GRSA Les linézolides (Zivoxid®) restent, en général, actifs sur les GISA.
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La détermination de la sensibilité aux glycopeptides ne doit pas être réalisée par diffusion en milieu gélosé. La méthode de référence pour la détermination des CMI des glycopeptides est la microdilution en milieu liquide (référence ISO 20776)
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bibliographie www.sante.dz/aarn/documents/word/staph-ammari.doc EUCAST : Société Française de Microbiologie Ed ; 2018: p.55-63. Clinical and Laboratory Standards Institute 2015 Annales du contrôle national de qualité des analyses de biologie médicale